蛍光組織免疫受託試験

false positive（擬陽性）のリスクがあることで、蛍光免疫染色を否定していた当社が受託試験を開始します。

ただし、明視野での特異性が確認できた抗体のみの作業となります。

受託試験フローチャート

1. 抗体検索
   ↓
2. 明視野で染色条件検討
   ↓
3. 決定した染色条件に従い、明視野で本染色
   ↓
4. 良好な結果が得られた場合のみ、蛍光で本染色

• 弊社蛍光顕微鏡は、共焦点レーザー顕微鏡ではございません。
• 多重染色の場合、抗体の選択が必要となります。
• 多重染色は、3分子までとなります。
• 明視野での結果次第では、蛍光染色へ移行できないことがございます。
• バーチャルスキャン画像の提出は対応いたしておりません。

検討例

明視野で染色条件検討

• 抗体：F4/80
• 検体：マウス肝臓

抗原賦活化処理３条件とあわせて、抗体濃度を3条件を検討致します。（合計18条件）

アイソタイプコントロールとして、rat IgG2bも同様の作業を行いまして、最も特異性を示す条件を検討致します。

		抗体濃度5μg／mL	抗体濃度１μg／mL	抗体濃度0.２μg／mL
熱処理	F4/80
	rat IgG2b アイソタイプコントロール
酵素処理	F4/80
	rat IgG2b アイソタイプコントロール
無処理	F4/80
	rat IgG2b アイソタイプコントロール

明視野で特異性が確認でき、良好な結果が得られたので、蛍光で本試験を実施。

本試験実施例

• 抗体： F4/80
• 検体：マウス肝臓
• 抗原賦活化法：酵素処理
• 抗体濃度：0.2μg/ml

F4/80	蛍光染色（赤：F4/80, 青:DAPI)
rat IgG2b	蛍光染色（赤：rat IgG2b, 青:DAPI)

蛍光顕微鏡

• 本体: ECLIPSE Ni-U (Nikon)
• 対物レンズ
  ・4x Plan Apo λ
  ・10x Plan Apo λ
  ・20x Plan Apo VC
  ・40x Plan Apo λ
  ・100x HP Plan Apo VC (oil)

• 蛍光装置光源: 蛍光LED照明システム D-LEDI
• カメラ: DS-Qi2 (1625万画素モノクロCMOSセンサー)
• 蛍光フィルター: DAPI, FITC, Texas Red, Cy5

染色例1

ラット脳 Iba-1 (green)  +  GFAP (red)	マウス脾臓 CD3 (green)  +  CD8 (red)

染色例２

マウスE18.5 αSMA (green)  +  CD31 (red) x20	x40

お見積もり及びご依頼方法

納期はご依頼内容を確認させて頂いたのちにご回答申し上げます。

03-5615-8857
受付時間： 10:00〜17:00（土日祝日休み）受託依頼の
お問い合わせは「お問い合わせフォーム」よりお願致します。